在液相色谱中对组分复杂的样品广泛采用梯度洗脱的方法。梯度洗脱是指在同一个分析周期中随着时间的变化按一定程序梯度性地改变洗脱液的比例(浓度配比、成分、离子强度、溶液极性等)或pH，以期将层析柱上不同的组分洗脱出来的方法。
在液相色谱中梯度洗脱装置分两种：
1.高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入
2.低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。
梯度洗脱可提高分离度、缩短分离时间、降低小检测量和提高分离精度。
梯度洗脱使用时应注意:
1、注意各溶剂间的互溶性。
2、对溶剂的纯度要求更高（影响重现性）。
3、注意梯度变化时系统压力的变化，防止超出限度。
4、梯度结束后，用初始流动相冲洗，使柱子平衡一段时间（再生），使系统回复到初始状态。（梯度周期）
5、低压梯度要注意脱气，混合后容易产生气泡。
6、容易出现鬼峰，应作空白试验。
7、梯度选择时尽量几相之间相变化要小,否则不易平衡。
8、梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）。
9、要注意水相中盐的浓度，防止在有机相提升过程中盐的析出。
