二维液相色谱(2DLC)就是将分离机理不同但又相互独立的两支色谱柱串联起来构成的分离系统。样品首先经过di一维的色谱柱进入接口，通过浓缩、富集或切割后被切换进入到第二维色谱柱和检测器。
二维分离采用两种不同的分离机理分离样品，即利用样品的两种不同特性把复杂混合物分离成单一组分，这些特性包括极性差别、分子量、基团差别、空间构形、酸碱性等，将具有不同分离效果的色谱分离模式进行组合，使复杂体系的样品在一维系统中不能*分离的组分可能在二维系统中得到更好的分离，与一维系统相比，分辨率和分离能力都能得到很大的提高。
根据di一维馏分是否直接转移到第二维，可把二维色谱分为离线(off-line)和在线(on-1ine)两种模式，离线模式对仪器的要求相对低，但是操作起来耗时耗力，难以实现自动化和重复性，并且在样品处理过程中由于人为操作容易产生样品的损失和污染。在线模式操作快，重复性好，可以避免人为误差，提高样品分析速率，具有更高的分离效率，但是对仪器设备的要求较高。
按照di一维的馏分是否全部进入第二维，又可将其分为中心切割(heartcutting)二维液相色谱和全二维(comprehensive)液相色谱，前者是将di一维色谱柱分离出的某个或者某些目标组分转移到第二维进行继续分析，适合目标组分的分析；后者是将di一维的馏分全部进入到第二维进行分离，主要通过在线二维液相色谱来实现。
基于不同的分离目的，可以采用不同分离机理来构建二维液相色谱分离系统，例如，反相色谱(RPLC)、正相色谱(NP)、离子交换色谱(IEX)、亲和色谱(AC)、尺寸排阻色谱(sEc)等分离模式。
我们常用反相色谱与正相色谱，而亲水色谱(HILIC)是被认为是正相色谱(NP)的替代选择，HILIC模式使用的梯度和反相模式相反。初始条件包括高比例有机相，典型的浓度是95%有机相如乙腈或甲醇，然后逐步降低到水相。
